微生物学实验技术的目录

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第一部分 基础微生物学实验技术

实验一 普通光学显微镜的结构与使用

实验二 培养基的配制与灭菌

实验三 微生物接种技术与细菌的接种和培养

实验四 细菌染色与形态观察

实验五 细菌的芽孢染色与观察

实验六 放线菌的接种与形态观察

实验七 酵母菌培养、水浸片制备与形态观察

实验八 酵母菌活体染色观察及死亡率的测定

实验九 酵母菌细胞大小及体积的测定

实验十 酵母菌细胞计数和出芽率的测定

实验十一 酵母菌子囊孢子的形成与观察

实验十二 霉菌培养与形态观察

实验十三 细菌的生理生化实验

实验十四 细菌菌落总数的测定山

实验十五 大肠菌群的测定

实验十六 物理因素对微生物生长的影响

实验十七 化学因素对微生物生长的影响

实验十八 产蛋白酶的枯草芽孢杆菌的分离

实验十九 溶源性菌株的检查及噬菌斑的观察

实验二十 大肠杆菌半乳糖基因高频转导

实验二十一 紫外线诱变育种_绘制细胞存活率和突变率曲线

实验二十二 枯草杆菌营养缺陷型突变遗传标记的制作

实验二十三 大肠杆菌质粒DNA的快速提取及琼脂糖凝胶电泳

实验二十四 大肠杆菌的遗传转化

实验二十五 异宗接合型酵母菌的杂交实验

实验二十六 微生物菌种保藏实验

第二部分 应用微生物学实验技术

第一章　显微技术

第一节 暗视野显微镜的使用

实验1.1 暗视野显微镜使用举例——细菌运动的观察

第二节 相差显微镜的使用

实验1.2 相差显微镜使用举例——酿酒酵母细胞内部结构的观察

第三节 荧光显微镜的使用

实验1.3 荧光显微镜使用举例——抗酸细菌的观察

第四节 电子显微镜的使用

一、透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）

二、扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope,SEM）

三、扫描透射电镜（Scanning Transmission Electron Microscope,STEM）

四、扫描隧道显微镜（Scanning Funneling：Microscope，STM）

实验1.4 电子显微镜的使用举例——电子显微镜样品的制备与观察

第五节 其它显微镜介绍

一、偏光显微镜

二、紫外光显微镜

三、激光扫描共聚焦显微镜

四、微分干涉差显微镜

五、多光子荧光显微镜

六、电镜X射线微区分析技术

第二章 消毒、灭菌及除菌技术

第一节 物理因素除菌的种类及方法

一、加热除菌

二、过滤除菌

三、辐射除菌

四、超声除菌

五、微波除菌

六、低温等离子除菌

第二节 化学药物的消毒与灭菌

一、优良消毒剂和防腐剂的特点

二、化学药物的灭菌原理

三、化学消毒剂的种类和应用形式

四、常用消毒剂的使用和灭菌原理

五、影响消毒剂作用的因素

六、消毒剂的使用原则

第三节 各类培养基常采用的灭菌方法及注意事项

一、各类培养基采用的灭菌方法

二、培养基灭菌的注意事项

第四节 无菌室和曲室的消毒与灭菌

一、福尔马林加热熏蒸

二、氧化熏蒸

三、硫熏蒸

第三章 微生物接种与培养技术

第一节 微生物的培养技术

一、好氧性微生物培养方法

二、厌氧微生物培养方法

实验3.1 丙酮丁醇梭状芽孢杆菌的厌氧培养

第二节 连续培养技术

第三节 同步培养技术

实验3.2 选择法获得同步生长酵母细胞的实验技术

实验3.3 诱导法获得霉菌分生孢子同步生长的实验技术

第四节 透析培养技术

实验3.4 乳酸杆菌与酵母菌的透析培养

第五节 高密度培养技术

实验3.5 产乳球菌素的乳酸乳球菌的膜过滤培养

第六节 原位分离培养技术

实验3.6 酿酒酵母酒精发酵的原位分离培养技术

第七节 补料分批培养技术

实验3.7 产杆菌肽地衣芽孢杆菌的补料分批培养

第八节 固体发酵技术

实验3.8 植酸酶的固体发酵

第四章　染色技术及微生物细胞结构观察

第五章　微生物生长控制

第六章　微生物纯种分离技术

第七章　微生物生理生化实验

第八章　微生物诱变育种实验

第九章　微生物细胞水平基因重组育种

第十章　基因工程育种

第十一章　分子杂交技术

第十二章　微生物免疫及现代检测技术

第十三章　微生物分类技术

第十四章　食品卫生微生物学检测

第十五章　微生物菌种保藏

附录

主要参考书目

……

枯草芽孢杆菌和大肠杆菌相互污染怎么分离

目前已发现30余种微生物可分泌角蛋白酶，这些微生物主要来自于真菌、放线菌和细菌，如真菌中的皮肤癣菌（Dermatophyte）和白色假丝酵母（Cnadina albicans），放线菌中的链霉菌（Streptomyces），细菌中的地衣芽抱杆菌（Bacillus licheniformis）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）等等。 真菌是最早被发现的能够产角蛋白酶的微生物。早在1899年，Ward就报道了Onygena equina（马爪甲团囊菌）能分解角蛋白。许多皮肤真菌类的微生物都有产角蛋白酶的功能，包括须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）、微孢长囊头孢霉菌（Doratomyces microsporus）[12]、红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）、鸡禽毛癣菌（Poultries Trichophyton）、石膏样小孢子菌（Microsporum gypseum）、犬小孢子菌（Microsporum canis）和白念珠菌（Monilia albicans）、黄曲霉（Aspergillus flavus）、热带念珠菌（Oidium tropioale）、近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）、克柔念珠菌（Candida krusei）等。皮肤真菌附着于皮肤后，首先会利用角蛋白酶将皮肤的角质降解，降解后产生了各种短肽和氨基酸，作为真菌生长的碳源和氮源。然后进一步侵入皮肤进行繁殖、感染，进而形成皮肤病。目前，一些有关致病真菌的研究已经日益展开，同时对角蛋白的降解机理和相关研究也起到了积极的作用。

除皮肤真菌外，还有一些其他真菌具有降解角蛋白的功能。Anbu等（2004）发现了一种产角蛋白酶的能力的短尾帚霉（Scopulariopsis brevicaulis），并对这种角蛋白酶进行分离纯化。Singh等研究了21种产角蛋白酶的真菌，发现其中猴发癣菌（Trichophyton simii）降解羽毛角蛋白的能力最强。罗文等从土壤中分离出一株能降解羽毛粉角蛋白的霉菌,初步鉴定为串孢属菌（Catenularia sp.）。Santos报道了分离到降解羽毛角蛋白的烟曲霉（Aspergillus fumigatus），它可以利用羽毛角蛋白作为唯一碳源和氮源生长。 目前已经筛选和分离到很多能降解角蛋白的细菌，主要为芽孢杆菌。Williamsh等（1989）由家禽羽毛发酵液中富集、分离到了羽毛分解菌，经鉴定为嗜热型地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），这种菌在以羽毛作为其主要的碳氮源的培养基条件下生长最适宜，但不能降解未经高温蒸煮的羽毛。其他芽孢杆菌包括嗜碱芽孢杆菌（Bacillus pseudofirmus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）等。另外具有角蛋白酶活性的细菌还有嗜热厌氧菌、弧菌科细菌（Vibrionaceae）、海岛闪光杆菌、金黄杆菌属等。

细菌生长快、易于繁殖、产酶活性高，角蛋白酶最适温度、pH值等性质特异，具有良好的应用潜力。

首先应该通过革兰氏染色确定是否被芽胞杆菌污染，然后用稀释涂平板方法纯化，必要时可再选也中加入少量的吐温，37度培养，必要时可用曙红亚甲蓝培养基，这上面长出的大肠杆菌有金属光泽，最后再次镜检单菌落。应该可以了，前提是你的培养基和操作不能被污染。

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