菌种纯化与复壮问题。

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真菌（以酵母为例）当然也存在复壮问题。一株酵母菌在多次繁殖后，会产生老化现象。需要复壮。老化现象一般表现是对数生长期不明显，曲线过于平缓；菌密度下降明显；稳定期短；产物产生量下降等。

酵母菌的复壮其实也是分离纯化培养，只是要把遗传性状稳定、生长良好的菌挑选出来。一般不用秋水仙素等，因为这类物质很容易造成菌种不可逆变异，导致菌种无法继续使用。

复壮的步骤一般是这样的。

将菌种在全营养培养基中液体培养，进入对数生长期后（时间不要太长，否则会繁殖过度），做较大批量的稀释平板。观察菌落生长情况，挑选生长优势菌落（长得快、长得大），检测其某方面的生理功能，如发酵力、产酸、产酶等。此过程重复进行，综合考虑生长优势与生理功能优势，直到得到生长强壮、生理功能满意的菌株。

一般一次复壮会多挑选几支进行对比选择，也会多留下几支，以备不时之需。

方法如下：

1 定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可；

2 液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次；

3 ?沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面；

4 ?真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热，用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养；

5 ?-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养?

6 ?液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

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